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  免疫印迹(WB)

 

简介 免疫印迹法(western blot,WB)是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术,用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。首先利用电泳技术将不同分子量蛋白分离,然后转移至硝酸纤维素膜(NC膜)或PVDF膜,再利用抗原抗体结合并染色的原理,检测目的蛋白的表达水平。

实验原理 Western blot采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物质是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如NC膜或PVDF膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

步骤示意图
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 裂解液    上样缓冲液        脱脂奶粉    内参抗体
 蛋白酶抑制剂    预制胶    电转液    BSA    二抗
 蛋白定量    PAGE 胶配制            标签抗体
     蛋白 marker            ECL化学发光液检测
     染色液            

 

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